انتقال ژن الانگاز به قارچ mortierella alpina

قارچ رشته ای mortierellaalpina از جمله قارچ های رشته ای oleaginous راسته زیگومیست ها ست که که منبع غنی از اسید های چرب غیر اشباع به ویژه آراشیدونیک اسید است این ماده پیش ساز تولید تعدادی از ایکوزانوئیدها است که درسوخت و ساز لیپوپروتئین، رئولوژی خون، فعال سازی پلاکت ها و عملکرد لوکوسیت ها و ویژگی های عملکردی غشاء سلولی نقش دارد. تحقیقات دانشمندان حاکی از آن است که ژن الانگاز آنزیم محدود کننده سنتز آراشیدونیک اسید در این قارچ می باشد. هدف از این پژوهش افزایش راندمان تولیدآراشیدونیک اسید در این قارچ با استفاده از فنون مهندسی ژنتیک بود.. تا کنون 5 روش تراریختی برای قارچ های رشته ای استفاده شده است. برای تراریختی این قارچ تلاش شد از روشی با بازده تراریختی بالا استفاده شود و با بررسی عوامل موثر تراریختی (دما، سویه باکتری، نوع بافت هدف، مدت زمان القا، نسبت سلول های باکتری به سلول های هدف) برای انتقال ژن با سامانه تراریختی amt (agrobacterium mediated transformation) با طراحی آزمایش به روش تاگوچی، با انتقال ژن نشانگر gus و بررسی پایداری میتوزی قارچ های تراریخت تا نسل سوم ( (t2برای قارچ alpina. m. بهینه سازی شد. در شرایط بهینه تراریختی برای سلول های میسیلیوم 3 روزه، استفاده از agrobacterium rhizogenese، مدت زمان القا 4 ساعت و دمای c° 22 و نسبت سلولهای باکتری به بافت هدف 3:1 درصد تراریختی 53 درصد بدست آمد. به منظور انتقال ژن مهم الانگاز، این ژن در ناقل بیانی pbi121، به جای ژن gus و تحت تاثیر پروموتور camv35s همسانه سازی و تحت شرایط بهینه به سلول های میسیلیومی منتقل شد. با استفاده از واکنش pcr، انتقال ژن موفق اثبات گردید. 3 کلنی از قارچ های تراریخت به طور تصادفی انتخاب و در محیط کشت مایع سوسپانسیون میسیلیومی کشت شدند و فعالیت آنزیمی با دستگاه گاز کروماتوگرافی سنجش شد. در قارچ های تراریخت افزایش 60 تا 95 درصدی معنی دار آراشیدونیک اسید نسبت به تیپ وحشی قارچ مشاهده شد.